將*培養(yǎng)基吸出保存在4℃環(huán)境下,培養(yǎng)瓶內留有5ml供細胞生長。經觀察,SY5Y的密度在80%左右,放至二氧化碳培養(yǎng)箱(37℃,5%二氧化碳)培養(yǎng)。
使用含有EDTA的胰酶消化進行1:3傳代,約30S細胞成塊脫落,這說明消化過度。含有EDTA的胰酶消化能力強,下次傳代應注意縮短消化時間。消化過度,細胞成塊脫落,不易吹散。
傳代后,成團的細胞不利于營養(yǎng)物質的獲取和代謝廢物的排出,嚴重影響增殖,甚至導致凋亡。下午5時觀察,細胞均已鋪開貼壁,密度較大,狀態(tài)良好。為保險起見,在最初的培養(yǎng)中,使用的培養(yǎng)是*培養(yǎng)液。使用完畢后,得自己配:1640+15%滅活FBS+1%雙抗+1%谷氨酰胺。將FBS在二氧化碳培養(yǎng)箱放置35分鐘進行滅活。本來FBS凍存的,需在室溫下恢復室溫,方可放置于二氧化碳培養(yǎng)箱中。將泡酸的玻璃培養(yǎng)瓶、滴管、200ml玻璃瓶和尖底玻璃離心管清洗并高壓后風干。
介紹下SH-SY5Y:中文名稱人神經細胞母細胞瘤細胞,該細胞分化低、繁殖快、細胞形態(tài)、生理和生化功能與正常神經細胞相似。被廣泛應用于神經系統(tǒng)疾病發(fā)病機制研究和藥物作用機制方面的研究
[1]。該細胞可以產生兒茶酚胺和多巴胺,磁刺激的頻率和時間顯著影響兒茶酚胺的代謝!而兒茶酚胺與抑郁癥有關,因此,有人對體外培養(yǎng)的SH-SY5Y施加rTMS,探究rTMS可能存在的對抑郁癥的影響
[2]。該細胞還可以表達淀粉樣前體蛋白(amyloid precursor protern)和β淀粉樣蛋白(β-amyloid )
[3]。這個兩種蛋白與AD的發(fā)病機制有關。
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